Методика сбора и хранения образцов фитопатогенных грибов и поврежденных растений

Сбор и хранение образцов поврежденных растений и грибов

Сбор и хранение образцов поврежденных растений и грибов

Сбору подлежат образцы растений с хорошо выраженными признаками болезней и их возбудителей. Травянистые растения собирают целиком, включая цветы, плоды и корни; у деревьев и кустарников— преимущественно ветки с листьями. Обычно собирают части растений, имеющие признаки поражения в виде налетов, пятнистостей, подушечек, вздутий, деформаций, язв и т. п., а также растения без видимых признаков паразита, но засыхающие или с внезапно осыпающимися листьями.

Образцы больных растений собирают с момента всходов и до уборки урожая. Объектами фитопатологических исследований должны быть растения, произрастающие в поле, саду, огороде, на лугу и в лесу. Необходимо обследовать также неосвоенные участки земли — целину, залежь, болота и кустарники, так как многие дикие растения служат промежуточными хозяевами и переносчиками болезней культурных растений. При этом следует изучать и перезимовавшие части растений; на них могут сохраняться зимующие стадии (совершенная и несовершенная) многих патогенов, являющиеся источником новой инфекции в начале вегетации.

Зимой целесообразно проводить сбор пораженных частей растений при обследовании садов, а также овощехранилищ и складов посадочного материала.

Для получения спороношения от склероциев, недоразвитых перитециев, различных стром и других неспороносящих форм грибов их вместе с частями пораженных растений М. К. Хохряков (1969) рекомендует помещать с осени на зимовку в кассеты Клебана. Последние представляют собой миниатюрные прессетки, на деревянные рамы которых натягивают сетку из капрона или нержавеющей проволоки. Исследуемый образец (листья, стебли и т. п.) закладывают в 2-рамочную кассету. Между половинками сложенной вдвое однослойной фильтровальной бумаги вместе с этикеткой, написанной на пергаменте простым карандашом, связывают кассету и оставляют на поверхности почвы до весны. Важно положить кассету так, чтобы гриб в ней подвергался воздействию всех природных факторов: смачиванию и высушиванию, замораживанию и оттаиванию, инсоляции и затемнению и т. д.

Для перезимовки в естественных условиях помещают гриб в виде чистых культур в пробирках, ватные пробки которых обматывают пергаментной бумагой или калькой, затянутой у верхнего конца резинкой. В иных случаях оставляют на зимовку снопы травянистых растений, подвешивая их к рейкам.

Образцы пораженных растений сразу же после сбора закладывают в ботаническую папку или сетку и отделяют друг от друга фильтровальной или газетной бумагой. Если образцы завяли, их тщательно расправляют; те из них, которые не могут быть заложены в ботаническую сетку (ветви, клубни, плоды и т. п.), заворачивают в бумагу. Каждый образец должен быть снабжен этикеткой, в которой указывают место и дату сбора, вид и сорт растения, а также фамилию собравшего.

Если образцы предназначают для гербария, то их помещают в прессетку, предварительно отделив друг от друга слоем прокладочной бумаги. По мере увлажнения прокладочную бумагу заменяют сухой. В тех случаях, когда образцы не могут быть высушены (сочные плоды, корнеплоды и т. п.), их фиксируют в консервирующих жидкостях. Такими жидкостями служат спирт (70%-ный), формалин (5%-ный), смесь спирта с формалином, растворы поваренной соли (8—9%-ные) или медного купороса (1%-ный). Этими жидкостями заливают образцы, помещенные в стеклянную посуду.

Для более длительного хранения имеется несколько прописей. Наиболее употребительна смесь сульфата меди (СиS04-5Н20)— 180 г с негашеной известью (СаО) — 180 г и водой —22,7 л. Сульфат меди растворяют в течение ночи в 2 л воды. Известь погашают в 20,7 л воды и пропускают через тонкое сито. Если нет негашеной извести, то можно взять 272 г гашеной извести Са(ОН)2 и осторожно влить раствор сульфата меди в известковое молоко. Это дает наиболее тонко взвешенный осадок. Раствор используют сразу после приготовления.

Раствор Кнопа составляют из нитрата кальций [Са (N03)2] — 0,5 г, нитрата калия (KNO3) — 0,125 г, сульфата магния (МgS04-7Н20) — 0,125 г, фосфата калия (К2НРО4) — 0,125 г, хлорида железа (FeCl3) 5%-ного — 1 капля и дистиллированной воды—1 л.

Основной консервант для музейных образцов составляют из формальдегида (40%-ного)— 25 мл, спирта (95%-ного)— 150 мл и воды — 1 л.

Для сохранения зеленой окраски образцов их помещают в кипящую смесь из 1 части ледяной уксусной кислоты, насыщенной кристаллическим ацетатом меди, и четырех частей воды; кипятят 1—2 минуты до тех пор, пока не вернется зеленый цвет, и затем хранят в 5%-ном растворе формалина.

Другой удовлетворительный метод состоит в помещении материала в 5%-ный раствор сульфата меди не менее чем на 6 часов и не более чем на 24 часа. Затем образцы промывают водой и хранят в растворе сернистой кислоты (5—6% 302)—2 мл с 1 л дистиллированной воды.

Консервант Геслера для окрашенных фруктов составляют из хлорида цинка (50 г), 40%-ного формальдегида (25 мл), глицерина (25 г) и воды (1 л). Для окрашенных грибов применяют следующие составы: в случае, если в образце содержатся пигменты, нерастворимые в воде — ацетат ртути (10 г), ледяная уксусная кислота (5 мл) и вода (1 л); при наличии растворимых в воде пигментов — ацетат ртути (1 г), нейтральный ацетат свинца (10 г), ледяная уксусная кислота (10 мл) и 90%-пый спирт (1 л) либо сульфат цинка (25 г), 40%-ный формальдегид (10 мл) и вода (1 л).

Во избежание испарения жидкостей банки с фиксированными образцами закрывают притертыми пробками, обычные пробки заливают парафином. На каждую банку наклеивают этикетку.

Микроскопические препараты готовят с лактофенолом и неколом. Лактофенол с анилиновым синим служит основным консервантом для постоянных препаратов, которые могут быть гермитизированы лаком для ногтей (лучше наносить несколько тонких слоев). Первый слой должен быть из бесцветного лака, иначе краситель из лака проникает в лактофенол. Последний слой из асфальтового лака должен придать большую крепость. Подогрев препарата перед наложением покровного стекла ускоряет окраску. Сухой пылевидный материал следует сначала увлажнить этилацетатом.

Препараты с неколом часто изготовляют при изучении грибов, растущих на поверхности субстрата. Некол или сходный препарат ацетата целлюлозы разводят ацетоном до консистенции глицерина. Небольшую каплю этой жидкости помещают на колонию гриба и подсушивают; это обычно занимает 15—30 минут. Тонкую бесцветную пленку, сформировавшуюся с заключенным в ней грибом, после окончательного подсыхания снимают скальпелем и помещают между двумя покровными стеклами в чистый глицерин.

Некоторые грибы образуют нежный конидиальный аппарат. Чтобы сделать хорошие препараты, используют культуры на стеклах. При этом весьма важно соблюсти условия стерильности и работу ведут под стерильными чашками Петри, поверхность которых протирают спиртом, а все инструменты, покровные и предметные стекла тщательно стерилизуют.

Для создания культуральных блоков на предметных стеклах вырезают из агара в чашках Петри кусок размером 7 мм2, инокулируют минимальным количеством спор с каждой стороны, закрывают покровным стеклом и помещают во влажную камеру (устройство камеры описано ниже). Когда культура достигает зрелости, часть спор и спороносных структур прикрепляют к предметному и покровному стеклам. Агаровый блок удаляют и делают препараты, добавляя лактофенол; образцы со структурами гриба на предметных стеклах накрывают покровным стеклом, которое закрепляют. Избежать загрязнения из воздуха можно осторожным нагревом.

Метод использования покровных стекол предусматривает рост гриба в их центре. Для этого чашку Петри заливают подходящей средой и дают ей застыть. Затем делают два диаметральньх разреза агара под прямым углом обожженным скальпелем. Полученные треугольники агара приподымают и под каждый из них с краев подкладывают обожженные покровные стекла, которые затем заменяют. Чашку переворачивают и расположение стекол, видное через стекло чашки, обводят восковым карандашом; в центре стекол ограничивают карандашом четырехугольные участки со сторонами 6—8 мм. Затем чашку снова переворачивают, ненужные кусочки агара вырезают и удаляют, при этом обведенные квадраты просвечивают сквозь агар. Среду инокулируют и чашку ставят в инкубатор. В конечном итоге гриб растет и распространяется по открытой поверхности каждого стекла, в чем можно убедиться под бинокуляром. При достаточном распространении гриба покровные стекла удаляют с вырезкой окружающего агара (повреждая гифы, если нужно) и делают обычным способом препараты.

В случае, если необходимо переслать свежие образцы, поступают следующим образом: сразу же после сбора их помещают в такие условия, чтобы они не портились в дороге. Стебли и черенки пересылают в свежем, слегка влажном мху, плоды заворачивают в бумагу и перекладывают стружками и т. п. Мелкие образцы пересылают в бумажных пакетах. Нельзя попользовать полиэтиленовую пленку для длительного хранения и пересылки образцов, так как в пакете из такого материала создается большая влажность и образцы быстро загнивают.

Добавить комментарий

Войти с помощью: 

Ваш e-mail не будет опубликован. Обязательные поля помечены *